細胞培養室如何有效避免微生物交叉污染? | 細胞房消毒是一項非常重要的任務(wù),因為它可以預防細胞培養中的污染和交叉感染。細胞培養中常見(jiàn)的生物污染包括細菌芽孢霉菌支原體噬菌體污染等。對實(shí)驗室進(jìn)行定期清潔、使用高效型消毒劑是避免細胞培養過(guò)程中由于實(shí)驗室環(huán)境引起細胞污染的主要措施
對于細胞培養,污染是最大的敵人,不管是設備、試劑亦或是環(huán)境造成的污染,這是每個(gè)養細胞的同志所頭疼的事情,我們先識別下污染的分類(lèi):
細菌芽孢污染
培養細胞受細菌污染后,會(huì )出現培養液變混濁,pH改變。污染后細胞發(fā)生病理改變,生長(cháng)不良、胞內顆粒增多、增粗,最后變圓脫落死亡。以白色葡萄球菌較為常見(jiàn)。
真菌污染
培養細胞受真菌污染后,可見(jiàn)培養液中漂浮著(zhù)白色或淺黃色的小點(diǎn),有的散在生長(cháng),培養液一般不發(fā)生混濁;倒置顯微鏡下可見(jiàn)絲狀、管狀或樹(shù)枝狀的菌絲縱橫交錯在細胞之間或培養基中,有的呈鏈狀排列。真菌污染后,細胞生長(cháng)變慢,但最后由于營(yíng)養耗盡及毒性作用而使細胞脫落死亡。
支原體污染
支原體是沒(méi)有細胞核結構的原核生物,多吸附于細胞表面或散在于細胞之間,可抑制細胞的代謝和成長(cháng),改變核酸合成、影響細胞的抗原性、導致染色體改變等。培養細胞受支原體污染后,由于支原體生長(cháng)緩慢,開(kāi)始不易發(fā)現。部分敏感細胞可見(jiàn)細胞生長(cháng)增殖變慢,多數細胞污染后無(wú)明顯變化。若不及時(shí)處理,會(huì )產(chǎn)生交叉污染,又因常規培養基中預防細菌和霉菌的抗生素對它沒(méi)有作用,因此防治支原體的污染非常重要。
噬菌體污
噬菌體是一種寄生于細菌上的病毒,可以感染并破壞細菌。噬菌體污染會(huì )對實(shí)驗結果產(chǎn)生影響,影響實(shí)驗的可重復性和準確性。此外,噬菌體污染還可能導致實(shí)驗結果的誤解和實(shí)驗人員的健康威脅。
二細胞培養過(guò)程中環(huán)境污染途徑
1,取放細胞時(shí)引起的污染
細胞培養過(guò)程中,取放細胞是最基本的操作,培養房開(kāi)關(guān)門(mén)的瞬間,環(huán)境中的微生物或多或少會(huì )進(jìn)入培養箱中,而且內外溫差導致內門(mén)冷凝水的產(chǎn)生,極易吸附微生物,都是造成培養箱污染的風(fēng)險因素。
2,滅菌不到位造成的二次污染
細胞培養過(guò)程中,因其它操作問(wèn)題(如培養基潑灑,水盤(pán)污染等),造成培養房的大規模污染也時(shí)常會(huì )發(fā)生,此時(shí)就需要對培養箱進(jìn)行滅菌消毒,常規的消毒(如紫外照射)只能達到表面消毒的效果,特別是對真菌等頑固性污染,無(wú)法進(jìn)行有效滅菌,導致后續培養過(guò)程中細胞污染頻發(fā)。
三傳統消毒方式
在傳統的細胞房消毒方法中,常用紫外線(xiàn)、高溫、酒精等消毒方式。
01、紫外線(xiàn)消毒
紫外線(xiàn)消毒是通過(guò)紫外線(xiàn)殺死或去除微生物。
優(yōu)勢:適合無(wú)遮擋敞開(kāi)型環(huán)境和空氣消毒,能夠在短時(shí)間內達到殺菌效果。使用成本相對較低,由于不投加化學(xué)藥劑,不會(huì )對水和環(huán)境產(chǎn)生影響。
缺點(diǎn):殺菌效力較低,無(wú)法殺滅霉菌(孢子)、芽孢等高抗性微生物。一些被紫外線(xiàn)照射失活的細菌可形成“光復活",另外一些細菌可能存在著(zhù)“暗復活"現象。紫外線(xiàn)燈套容易結垢,需頻繁清洗以維持效果,另外紫外線(xiàn)存在老化問(wèn)題,要求現場(chǎng)操作人員具備較高技術(shù)工藝,及時(shí)測定衰減程度并進(jìn)行校正或更換,無(wú)法達到可控、可計量的消毒標準。紫外線(xiàn)不能直接照射人體,所以只能在無(wú)人情況下使用。受空間環(huán)境因素制約,所以通常作為一種輔助性消毒措施。
02、高溫消毒
高溫消毒是通過(guò)高溫殺死或去除微生物。高溫消毒有很多優(yōu)點(diǎn),例如能夠殺死微生物的內部、不會(huì )產(chǎn)生化學(xué)殘留物等。但是,高溫消毒也有一些缺點(diǎn)。首先,高溫消毒需要使用高溫設備,這會(huì )增加成本。其次,高溫消毒需要一定的時(shí)間,因此需要進(jìn)行計劃和安排。最后,高溫消毒可能會(huì )對一些細胞培養物造成損傷。
03、酒精擦拭消毒
酒精擦拭消毒是常見(jiàn)的一種消毒方法,但酒精易揮發(fā),不穩定。只能用于物體表面消毒,其消毒主要針對普通細菌,對高抗性的芽孢、霉菌等無(wú)效。
70%-75%乙醇優(yōu)勢是對細菌具有較好的殺滅作用,但對真菌的效力有限,可以使用奧克泰士來(lái)解決乙醇無(wú)法較好解決的酵母、霉菌、芽孢的污染問(wèn)題。
對于細胞培養實(shí)驗室來(lái)說(shuō),最重要的是杜絕一切可能的污染源。
四如何有效避免污染
1.重視細胞房管理工作,規范操作
定期進(jìn)行細胞房清潔消毒工作,規范實(shí)驗人員操作(如身著(zhù)白大褂、換鞋等),創(chuàng )造潔凈培養環(huán)境。
2.避免頻繁查看細胞
做好實(shí)驗規劃,減少培養箱門(mén)開(kāi)關(guān)的頻率,取放細胞時(shí)需佩戴潔凈的手套,并用少量的 70% 醫用酒精(過(guò)多會(huì )導致培養箱中殘留乙醇蒸汽)擦拭培養瓶/皿表面,從而降低細胞培養箱污染的風(fēng)險;
3.定期維護和滅菌,預防污染
定期清潔維護,培養箱內用水滅菌后使用并定期更換,選擇培養箱時(shí),可優(yōu)先考慮有自動(dòng)滅菌功能的培養箱。細胞房一旦發(fā)生污染,及時(shí)進(jìn)行消毒滅菌工作。
奧克泰士高效型殺孢子劑,滿(mǎn)足潔凈區和實(shí)驗室的苛刻滅菌要求:
01)快速高效殺滅芽孢、霉菌等高抗性微生物,
02)全面殺滅真菌、細菌、病毒等各種類(lèi)型的微生物。
03)食品級生態(tài)型,無(wú)色無(wú)味,呵護員工職業(yè)健康。
04)良好的材料兼容性,基本無(wú)腐蝕,適用于金屬、橡塑等各種材料。同時(shí),作用完畢后分解物只有水和氧氣,使用安全,沒(méi)有刺鼻氣味,環(huán)保型殺孢子劑。
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